人脐带间充质干细胞分离扩增方法的优化
【目的】 探究一种高效稳定分离、扩增人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）的方法。【方法】取材脐带20条，获得Wharton’s Jelly组织，分别用酶联合消化法（12例）和酶序贯消化法（8例）来分离、提取hUC-MSCs，比较两种方法分离hUC-MSCs的成功率、原代培养时间及获得的细胞数量；利用低糖DMEM（LG-DMEM）完全培养基和LD-Mesen培养基（MesenPro RSTM与LG-DMEM的混合培养基）分别培养hUC-MSCs，比较两种培养体系的扩增效率。对所获取细胞的免疫表型以流式细胞术进行鉴定，并诱导成脂、成骨分化验证其多向分化潜能。【结果】 酶联合消化法和酶序贯消化法成...
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| Format: | Article |
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| Language: | zho |
| Published: |
Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University
2011-01-01
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| Series: | Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban |
| Subjects: | |
| Online Access: | http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/43576345/ |
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| Summary: | 【目的】 探究一种高效稳定分离、扩增人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）的方法。【方法】取材脐带20条，获得Wharton’s Jelly组织，分别用酶联合消化法（12例）和酶序贯消化法（8例）来分离、提取hUC-MSCs，比较两种方法分离hUC-MSCs的成功率、原代培养时间及获得的细胞数量；利用低糖DMEM（LG-DMEM）完全培养基和LD-Mesen培养基（MesenPro RSTM与LG-DMEM的混合培养基）分别培养hUC-MSCs，比较两种培养体系的扩增效率。对所获取细胞的免疫表型以流式细胞术进行鉴定，并诱导成脂、成骨分化验证其多向分化潜能。【结果】 酶联合消化法和酶序贯消化法成功率分别为100%（12/12）和12.5%（1/8），二者相比有显著统计学差异（P=1.03×10-4），前者原代培养平均时间为（14.17±1.14）d，获得细胞（1.30±0.14）×106个。2×105个hUC-MSCs用LD-Mesen和LG-DMEM两种体系培养12d后，扩增所得的细胞数分别为(14.86±0.08)×106和(5.08±0.08)×106，二者有显著统计学差异（P=1.38×10-8)。hUC-MSCs高表达CD73、CD105、CD90、CD29、CD44，不表达CD31、CD34、CD45、HLA-DR；并可向成骨细胞及脂肪细胞诱导分化。【结论】 酶联合消化Wharton’s Jelly组织并以LD-Mesen体系进行扩增可高效获取hUC-MSCs，效率明显优于传统方法。 |
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| ISSN: | 1672-3554 |