人纤溶酶原 K5 突变体Ⅰ的构建及其在大肠杆菌中的表达与纯化
【目的】 构建人纤溶酶原Kringle 5(K5)的突变体Cys461-Cys540(K5 mut1),在大肠杆菌中表达,亲和层析纯化,为探讨K5抗血管增生活性与Kringle结构域的关系提供基础?【方法】 以K5全长cDNA为模板用PCR的方法扩增人纤溶酶原K5 mut1基因,将其克隆进表达载体pET-22b(+)中,并用限制性核酸内切酶酶切和DNA测序鉴定其连接正确;pET-22b(+)/K5 mut1 转化大肠杆菌BL21(DE3), IPTG诱导表达,表达产物用固化Ni2+-His Bind Resin亲和层析方法纯化,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和West...
Saved in:
| Main Author: | |
|---|---|
| Format: | Article |
| Language: | zho |
| Published: |
Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University
2004-01-01
|
| Series: | Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban |
| Online Access: | http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/43584943/ |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| _version_ | 1841529061979979776 |
|---|---|
| author | 蔡卫斌 |
| author_facet | 蔡卫斌 |
| author_sort | 蔡卫斌 |
| collection | DOAJ |
| description | 【目的】 构建人纤溶酶原Kringle 5(K5)的突变体Cys461-Cys540(K5 mut1),在大肠杆菌中表达,亲和层析纯化,为探讨K5抗血管增生活性与Kringle结构域的关系提供基础?【方法】 以K5全长cDNA为模板用PCR的方法扩增人纤溶酶原K5 mut1基因,将其克隆进表达载体pET-22b(+)中,并用限制性核酸内切酶酶切和DNA测序鉴定其连接正确;pET-22b(+)/K5 mut1 转化大肠杆菌BL21(DE3), IPTG诱导表达,表达产物用固化Ni2+-His Bind Resin亲和层析方法纯化,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blot方法分析鉴定?【结果】 PCR扩增获得258 bp的人纤溶酶原K5 mut1基因片段,正确插入pET-22 b(+)载体,在大肠杆菌中该基因编码蛋白的表达量占菌体总蛋白13%左右;SDS-PAGE显示其相对分子质量Mr≈14.1×103,Western blot证实该表达蛋白为K5 mut1重组蛋白,经亲和层析后K5 mut1重组蛋白纯度大于90%,获得率约为10 mg/L?【结论】 成功构建人纤溶酶原K5 mut1,实现在大肠杆菌中高效表达,亲和层析纯化获得较高纯度K5 mut1重组蛋白? |
| format | Article |
| id | doaj-art-efaaf46472464d0e90b89ce278ccdf4b |
| institution | Kabale University |
| issn | 1672-3554 |
| language | zho |
| publishDate | 2004-01-01 |
| publisher | Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University |
| record_format | Article |
| series | Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban |
| spelling | doaj-art-efaaf46472464d0e90b89ce278ccdf4b2025-01-15T03:26:33ZzhoEditorial Office of Journal of Sun Yat-sen UniversityZhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban1672-35542004-01-012543584943人纤溶酶原 K5 突变体Ⅰ的构建及其在大肠杆菌中的表达与纯化蔡卫斌【目的】 构建人纤溶酶原Kringle 5(K5)的突变体Cys461-Cys540(K5 mut1),在大肠杆菌中表达,亲和层析纯化,为探讨K5抗血管增生活性与Kringle结构域的关系提供基础?【方法】 以K5全长cDNA为模板用PCR的方法扩增人纤溶酶原K5 mut1基因,将其克隆进表达载体pET-22b(+)中,并用限制性核酸内切酶酶切和DNA测序鉴定其连接正确;pET-22b(+)/K5 mut1 转化大肠杆菌BL21(DE3), IPTG诱导表达,表达产物用固化Ni2+-His Bind Resin亲和层析方法纯化,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blot方法分析鉴定?【结果】 PCR扩增获得258 bp的人纤溶酶原K5 mut1基因片段,正确插入pET-22 b(+)载体,在大肠杆菌中该基因编码蛋白的表达量占菌体总蛋白13%左右;SDS-PAGE显示其相对分子质量Mr≈14.1×103,Western blot证实该表达蛋白为K5 mut1重组蛋白,经亲和层析后K5 mut1重组蛋白纯度大于90%,获得率约为10 mg/L?【结论】 成功构建人纤溶酶原K5 mut1,实现在大肠杆菌中高效表达,亲和层析纯化获得较高纯度K5 mut1重组蛋白?http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/43584943/ |
| spellingShingle | 蔡卫斌 人纤溶酶原 K5 突变体Ⅰ的构建及其在大肠杆菌中的表达与纯化 Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban |
| title | 人纤溶酶原 K5 突变体Ⅰ的构建及其在大肠杆菌中的表达与纯化 |
| title_full | 人纤溶酶原 K5 突变体Ⅰ的构建及其在大肠杆菌中的表达与纯化 |
| title_fullStr | 人纤溶酶原 K5 突变体Ⅰ的构建及其在大肠杆菌中的表达与纯化 |
| title_full_unstemmed | 人纤溶酶原 K5 突变体Ⅰ的构建及其在大肠杆菌中的表达与纯化 |
| title_short | 人纤溶酶原 K5 突变体Ⅰ的构建及其在大肠杆菌中的表达与纯化 |
| title_sort | 人纤溶酶原 k5 突变体i的构建及其在大肠杆菌中的表达与纯化 |
| url | http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/43584943/ |
| work_keys_str_mv | AT càiwèibīn rénxiānróngméiyuánk5tūbiàntǐidegòujiànjíqízàidàchánggānjūnzhōngdebiǎodáyǔchúnhuà |