AVALIAÇÃO DE ENSAIOS CLONOGÊNICOS REALIZADOS EM PRODUTOS DE AFÉRESE CRIOPRESERVADOS PARA USO EM TRANSPLANTE AUTÓLOGO
Objetivo: Realizou-se um estudo retrospectivo com amostras de pacientes para avaliar o desempenho do Ensaio Clonogênico (EC) em produtos pré e pós criopreservação e a capacidade de reprodução de resultados a depender das condições analíticas e método de plaqueamento. Materiais e métodos: Analisou-se...
Saved in:
| Main Authors: | , , , , , |
|---|---|
| Format: | Article |
| Language: | English |
| Published: |
Elsevier
2024-10-01
|
| Series: | Hematology, Transfusion and Cell Therapy |
| Online Access: | http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2531137924020571 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| _version_ | 1850182163662635008 |
|---|---|
| author | GC Silva TL Pereira ASCP Campos HDS Dutra R Schaffel A Maiolino |
| author_facet | GC Silva TL Pereira ASCP Campos HDS Dutra R Schaffel A Maiolino |
| author_sort | GC Silva |
| collection | DOAJ |
| description | Objetivo: Realizou-se um estudo retrospectivo com amostras de pacientes para avaliar o desempenho do Ensaio Clonogênico (EC) em produtos pré e pós criopreservação e a capacidade de reprodução de resultados a depender das condições analíticas e método de plaqueamento. Materiais e métodos: Analisou-se um banco de dados de 399 amostras de homens (n = 279) e mulheres (n = 120), entre 2013 e 2019, que tinham como doença de base: Mieloma Múltiplo (n = 69), Linfoma de Hodgkin (n = 35), Linfoma Não Hodgkin (n = 16), os quais foram submetidos à mobilização de CPH, leucaférese, criopreservação e posterior realização de TCPH. Analisaram-se amostras das etapas: pré criopreservação (n = 173), pós criopreservação (n = 174), repetição de amostras pós criopreservação (n = 45) e controle de reinfusão (n = 6). Compararam-se amostras de até 3 aféreses e até 3 mobilizações. O EC foi realizado por cultura de células do produto de leucaférese, em meio de cultura semi-sólido contendo Meio Iscove's modificado, ágar 1,8%, soro fetal bovino e meio condicionado de linhagem 5637, como fonte de fator de crescimento. Plaqueia-se 2000 células CD34+ no teste pré crio e 4000 células no pós crio. Houve incubação em estufa de 5% CO2, a 37°C por 14 dias. Colônias com mais de 50 células foram quantificadas em microscópio invertido.A quantificação de células CD34+ se deu pelo protocolo ISHAGE. Os dados foram avaliados no GraphPad Prisma versão 5. Resultados: Analisaram-se as medianas da razões entre valores de CD34/CFU-GM de amostras pré e pós crio e eventuais repetições. A mediana das amostras pré crio foi de 35 (5‒2143) e em amostras pós crio foi de 102 (1.970‒19.171), mostrando que houve significativa perda da capacidade proliferativa (p < 0,0001; Mann-Whitney U). A mediana da RCD34/CFU-GM das amostras pós crio e repetição, não foi significativamente diferente (p = 0,7614; t-test). Ensaios que tiveram RCD34/CFU-GM fora do valor esperado foram repetidos e apenas 20% destes mostram diferença entre os resultados. Comparando-se a RCD34/CFU-GM dos produtos pós crio nas aféreses realizadas, estes também se reproduzem (p = 0,2159; t-test). Ao relacionar o número de dias até a pega do enxerto com a RCD34/CFU-GM observou-se que não há correlação significativa entre esses índices (p = 0,9338; t-test). Discussão: O EC para CFU-GM (Unidade Formadora de Colônia para Granulócitos e Macrófagos), quantifica e qualifica as CPH e integra o grupo de exames que os centros de processamento celular realizam para avaliar a qualidade dos seus produtos, antes de realizar o TCPH. Apesar de seus resultados apresentarem grandes variações, o EC pode expressar prejuízos decorrentes da criopreservação celular, como o que ocorre ao compararmos amostras pré e pós criopreservação. Os resultados mostram que valores outliers podem representar características intrínsecas do paciente, reforçando que os valores não derivam de erros técnicos inerentes ao processo. A ausência de diferença significativa da RCD34/CFU-GM entre os resultados das aféreses, também reforça a ideia anterior. Apesar disso, observou-se que o EC não pode ser considerado como um preditor de pega do enxerto, pois pacientes que tiveram razão mais alta do que outros, não apresentaram diferença na quantidade de dias até a pega. Conclusão: O EC, apesar de ser reprodutível, sejam repetições ou aféreses realizadas, não pode ser visto como um preditor de pega do enxerto. Porém, é seguro para avaliar a capacidade proliferativa de produtos de TCPH. |
| format | Article |
| id | doaj-art-b229e0b6bb7047728bcd2f382e31996e |
| institution | OA Journals |
| issn | 2531-1379 |
| language | English |
| publishDate | 2024-10-01 |
| publisher | Elsevier |
| record_format | Article |
| series | Hematology, Transfusion and Cell Therapy |
| spelling | doaj-art-b229e0b6bb7047728bcd2f382e31996e2025-08-20T02:17:41ZengElsevierHematology, Transfusion and Cell Therapy2531-13792024-10-0146S1012S101310.1016/j.htct.2024.09.1724AVALIAÇÃO DE ENSAIOS CLONOGÊNICOS REALIZADOS EM PRODUTOS DE AFÉRESE CRIOPRESERVADOS PARA USO EM TRANSPLANTE AUTÓLOGOGC Silva0TL Pereira1ASCP Campos2HDS Dutra3R Schaffel4A Maiolino5Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ), Rio de Janeiro, RJ, Brasil; Hospital Universitário Clementino Fraga Filho (HUCFF), Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ), Rio de Janeiro, RJ, BrasilUniversidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ), Rio de Janeiro, RJ, Brasil; Hospital Universitário Clementino Fraga Filho (HUCFF), Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ), Rio de Janeiro, RJ, BrasilUniversidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ), Rio de Janeiro, RJ, Brasil; Hospital Universitário Clementino Fraga Filho (HUCFF), Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ), Rio de Janeiro, RJ, BrasilUniversidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ), Rio de Janeiro, RJ, Brasil; Hospital Universitário Clementino Fraga Filho (HUCFF), Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ), Rio de Janeiro, RJ, BrasilUniversidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ), Rio de Janeiro, RJ, Brasil; Hospital Universitário Clementino Fraga Filho (HUCFF), Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ), Rio de Janeiro, RJ, BrasilUniversidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ), Rio de Janeiro, RJ, Brasil; Hospital Universitário Clementino Fraga Filho (HUCFF), Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ), Rio de Janeiro, RJ, BrasilObjetivo: Realizou-se um estudo retrospectivo com amostras de pacientes para avaliar o desempenho do Ensaio Clonogênico (EC) em produtos pré e pós criopreservação e a capacidade de reprodução de resultados a depender das condições analíticas e método de plaqueamento. Materiais e métodos: Analisou-se um banco de dados de 399 amostras de homens (n = 279) e mulheres (n = 120), entre 2013 e 2019, que tinham como doença de base: Mieloma Múltiplo (n = 69), Linfoma de Hodgkin (n = 35), Linfoma Não Hodgkin (n = 16), os quais foram submetidos à mobilização de CPH, leucaférese, criopreservação e posterior realização de TCPH. Analisaram-se amostras das etapas: pré criopreservação (n = 173), pós criopreservação (n = 174), repetição de amostras pós criopreservação (n = 45) e controle de reinfusão (n = 6). Compararam-se amostras de até 3 aféreses e até 3 mobilizações. O EC foi realizado por cultura de células do produto de leucaférese, em meio de cultura semi-sólido contendo Meio Iscove's modificado, ágar 1,8%, soro fetal bovino e meio condicionado de linhagem 5637, como fonte de fator de crescimento. Plaqueia-se 2000 células CD34+ no teste pré crio e 4000 células no pós crio. Houve incubação em estufa de 5% CO2, a 37°C por 14 dias. Colônias com mais de 50 células foram quantificadas em microscópio invertido.A quantificação de células CD34+ se deu pelo protocolo ISHAGE. Os dados foram avaliados no GraphPad Prisma versão 5. Resultados: Analisaram-se as medianas da razões entre valores de CD34/CFU-GM de amostras pré e pós crio e eventuais repetições. A mediana das amostras pré crio foi de 35 (5‒2143) e em amostras pós crio foi de 102 (1.970‒19.171), mostrando que houve significativa perda da capacidade proliferativa (p < 0,0001; Mann-Whitney U). A mediana da RCD34/CFU-GM das amostras pós crio e repetição, não foi significativamente diferente (p = 0,7614; t-test). Ensaios que tiveram RCD34/CFU-GM fora do valor esperado foram repetidos e apenas 20% destes mostram diferença entre os resultados. Comparando-se a RCD34/CFU-GM dos produtos pós crio nas aféreses realizadas, estes também se reproduzem (p = 0,2159; t-test). Ao relacionar o número de dias até a pega do enxerto com a RCD34/CFU-GM observou-se que não há correlação significativa entre esses índices (p = 0,9338; t-test). Discussão: O EC para CFU-GM (Unidade Formadora de Colônia para Granulócitos e Macrófagos), quantifica e qualifica as CPH e integra o grupo de exames que os centros de processamento celular realizam para avaliar a qualidade dos seus produtos, antes de realizar o TCPH. Apesar de seus resultados apresentarem grandes variações, o EC pode expressar prejuízos decorrentes da criopreservação celular, como o que ocorre ao compararmos amostras pré e pós criopreservação. Os resultados mostram que valores outliers podem representar características intrínsecas do paciente, reforçando que os valores não derivam de erros técnicos inerentes ao processo. A ausência de diferença significativa da RCD34/CFU-GM entre os resultados das aféreses, também reforça a ideia anterior. Apesar disso, observou-se que o EC não pode ser considerado como um preditor de pega do enxerto, pois pacientes que tiveram razão mais alta do que outros, não apresentaram diferença na quantidade de dias até a pega. Conclusão: O EC, apesar de ser reprodutível, sejam repetições ou aféreses realizadas, não pode ser visto como um preditor de pega do enxerto. Porém, é seguro para avaliar a capacidade proliferativa de produtos de TCPH.http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2531137924020571 |
| spellingShingle | GC Silva TL Pereira ASCP Campos HDS Dutra R Schaffel A Maiolino AVALIAÇÃO DE ENSAIOS CLONOGÊNICOS REALIZADOS EM PRODUTOS DE AFÉRESE CRIOPRESERVADOS PARA USO EM TRANSPLANTE AUTÓLOGO Hematology, Transfusion and Cell Therapy |
| title | AVALIAÇÃO DE ENSAIOS CLONOGÊNICOS REALIZADOS EM PRODUTOS DE AFÉRESE CRIOPRESERVADOS PARA USO EM TRANSPLANTE AUTÓLOGO |
| title_full | AVALIAÇÃO DE ENSAIOS CLONOGÊNICOS REALIZADOS EM PRODUTOS DE AFÉRESE CRIOPRESERVADOS PARA USO EM TRANSPLANTE AUTÓLOGO |
| title_fullStr | AVALIAÇÃO DE ENSAIOS CLONOGÊNICOS REALIZADOS EM PRODUTOS DE AFÉRESE CRIOPRESERVADOS PARA USO EM TRANSPLANTE AUTÓLOGO |
| title_full_unstemmed | AVALIAÇÃO DE ENSAIOS CLONOGÊNICOS REALIZADOS EM PRODUTOS DE AFÉRESE CRIOPRESERVADOS PARA USO EM TRANSPLANTE AUTÓLOGO |
| title_short | AVALIAÇÃO DE ENSAIOS CLONOGÊNICOS REALIZADOS EM PRODUTOS DE AFÉRESE CRIOPRESERVADOS PARA USO EM TRANSPLANTE AUTÓLOGO |
| title_sort | avaliacao de ensaios clonogenicos realizados em produtos de aferese criopreservados para uso em transplante autologo |
| url | http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2531137924020571 |
| work_keys_str_mv | AT gcsilva avaliacaodeensaiosclonogenicosrealizadosemprodutosdeaferesecriopreservadosparausoemtransplanteautologo AT tlpereira avaliacaodeensaiosclonogenicosrealizadosemprodutosdeaferesecriopreservadosparausoemtransplanteautologo AT ascpcampos avaliacaodeensaiosclonogenicosrealizadosemprodutosdeaferesecriopreservadosparausoemtransplanteautologo AT hdsdutra avaliacaodeensaiosclonogenicosrealizadosemprodutosdeaferesecriopreservadosparausoemtransplanteautologo AT rschaffel avaliacaodeensaiosclonogenicosrealizadosemprodutosdeaferesecriopreservadosparausoemtransplanteautologo AT amaiolino avaliacaodeensaiosclonogenicosrealizadosemprodutosdeaferesecriopreservadosparausoemtransplanteautologo |