小鼠端粒酶蛋白亚单位重组腺病毒载体的构建及鉴定
【目的】构建小鼠端粒酶蛋白亚单位（mouse telomerase reverse transcriptase，mTERT）基因重组腺病毒载体，为下一步研究其体外表达和动物实验研究提供基础。【方法】从肝癌细胞中提取总RNA。采用RT-PER技术扩增mTERT的基因编码区序列，将序列定向克隆至真核表达载体pAC，将此表达质粒与腺病毒重组质粒pJM17共同转染293细胞，经同源重组产生重组腺病毒载体Ad-mTERT，纯化后的重组腺病毒载体Ad-mTERT在293细胞大量扩增并通过氯化铯密度梯度离心法纯化，测定病毒滴度。【结果】PCR及酶切证实：mTERTDNA正确克隆到穿梭质粒pAC中，带mTER...
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| Main Authors: | , , , , , , , |
|---|---|
| Format: | Article |
| Language: | zho |
| Published: |
Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University
2006-01-01
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| Series: | Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban |
| Subjects: | |
| Online Access: | http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/43585357/ |
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|---|---|
| author | 姜楠 陆敏强 李华 蔡常洁 杨扬 许赤 冯炼强 陈规划 |
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| description | 【目的】构建小鼠端粒酶蛋白亚单位（mouse telomerase reverse transcriptase，mTERT）基因重组腺病毒载体，为下一步研究其体外表达和动物实验研究提供基础。【方法】从肝癌细胞中提取总RNA。采用RT-PER技术扩增mTERT的基因编码区序列，将序列定向克隆至真核表达载体pAC，将此表达质粒与腺病毒重组质粒pJM17共同转染293细胞，经同源重组产生重组腺病毒载体Ad-mTERT，纯化后的重组腺病毒载体Ad-mTERT在293细胞大量扩增并通过氯化铯密度梯度离心法纯化，测定病毒滴度。【结果】PCR及酶切证实：mTERTDNA正确克隆到穿梭质粒pAC中，带mTERTDNA的表达盒成功重组到腺病毒载体基因组E1A缺失区，并在293细胞中成功包装出具有感染活性的重组腺病毒Ad-mTERT。【结论】成功构建了小鼠TERT基因重组腺病毒载体，为研究其用于肿瘤的基因治疗奠定基础。 |
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| institution | Kabale University |
| issn | 1672-3554 |
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| publishDate | 2006-01-01 |
| publisher | Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University |
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| series | Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban |
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