慢病毒携带shRNA抑制CR-1基因表达对 CNE-2细胞特性的影响

慢病毒携带shRNA抑制CR-1基因表达对 CNE-2细胞特性的影响

【目的】 应用慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)技术,有效沉默鼻咽癌细胞CNE-2的CR-1基因表达,研究CR-1对鼻咽癌细胞生物学行为的影响65377; 【方法】 构建针对CR-1的siRNA慢病毒表达载体[含H1启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]65377;利用包装细胞293FT生产慢病毒,感染鼻咽癌细胞CNE-2, 流式筛选GFP阳性细胞65377;应用荧光定量PCR65380;Western blot检测病毒感染后CNE-2细胞中CR-1基因的mRNA和蛋白表达,获得干扰CR-1基因的细胞群65377;并用MTT法65380;平板克隆形成实验及Boyden侵袭小室观察CR-1干扰后对CN...

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Bibliographic Details
Format: Article
Language:zho
Published: Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University 2009-01-01
Series:Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban
Subjects:
RNA 干扰
慢病毒
CR-1
鼻咽癌
Online Access:http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/43579646/
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Description
Summary:【目的】 应用慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)技术,有效沉默鼻咽癌细胞CNE-2的CR-1基因表达,研究CR-1对鼻咽癌细胞生物学行为的影响65377; 【方法】 构建针对CR-1的siRNA慢病毒表达载体[含H1启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]65377;利用包装细胞293FT生产慢病毒,感染鼻咽癌细胞CNE-2, 流式筛选GFP阳性细胞65377;应用荧光定量PCR65380;Western blot检测病毒感染后CNE-2细胞中CR-1基因的mRNA和蛋白表达,获得干扰CR-1基因的细胞群65377;并用MTT法65380;平板克隆形成实验及Boyden侵袭小室观察CR-1干扰后对CNE-2细胞生物学行为的影响65377; 【结果】 PCR 和测序证实,成功构建了CR-1 shRNA的慢病毒载体pLVTHM-shCR-165377;荧光定量PCR 和Western blot结果表明,所获得的细胞中CR-1 mRNA及蛋白表达水平较阴性对照组65380;空白对照组均显著降低(P < 0.05)65377;CR-1干扰后的细胞生长明显减慢,克隆形成能力减弱,侵袭运动能力下降65377; 【结论】 通过RNAi技术阻断CR-1的表达,可抑制CNE-2细胞的生长65380;增殖65380;迁徙,提示CR-1在鼻咽癌的发生65380;发展过程中起重要作用65377;
ISSN:1672-3554

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