整合素β4调控脑血管发育
目的探讨整合素β4（ITGB4）对脑血管生长发育的调控作用。方法通过逆转录PCR（RT-PCR）检测靶向<italic>itgb4</italic> mRNA序列的吗啉环（MO）在斑马鱼胚胎中的敲低效果。利用体视显微镜和激光共聚焦显微镜（laser scanning confocal microscope， LSCM）观察抑制<italic>itgb4</italic>表达后，斑马鱼胚胎脑部血管的发育变化。通过在斑马鱼胚胎中注射4，6-联脒-2-苯基吲哚（DAPI）染料检测血脑屏障（BBB）发育的完整性。使用小干扰RNA（small interf...
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| Main Authors: | , , , |
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| Format: | Article |
| Language: | zho |
| Published: |
Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University
2022-09-01
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| Series: | Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban |
| Subjects: | |
| Online Access: | http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/doi/10.13471/j.cnki.j.sun.yat-sen.univ(med.sci).2022.0507/ |
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| Summary: | 目的探讨整合素β4（ITGB4）对脑血管生长发育的调控作用。方法通过逆转录PCR（RT-PCR）检测靶向<italic>itgb4</italic> mRNA序列的吗啉环（MO）在斑马鱼胚胎中的敲低效果。利用体视显微镜和激光共聚焦显微镜（laser scanning confocal microscope， LSCM）观察抑制<italic>itgb4</italic>表达后，斑马鱼胚胎脑部血管的发育变化。通过在斑马鱼胚胎中注射4，6-联脒-2-苯基吲哚（DAPI）染料检测血脑屏障（BBB）发育的完整性。使用小干扰RNA（small interfering RNA， siRNA）在永生化人脑微血管内皮细胞（hCMEC/D3）中敲低<italic>ITGB4</italic>，用蛋白免疫印迹（WB）检测其敲低效果。通过活细胞成像分析仪（IncuCyte®）、基质胶（Matrigel® matrix）成管实验和transwell迁移实验分别检测ITGB4在hCMEC/D3中调控细胞增殖、成管和迁移的作用。应用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测敲低<italic>itgb4</italic>后Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因表达变化。结果在斑马鱼胚胎中敲降<italic>itgb4</italic>引起脑水肿、脑部出血、血脑屏障形成障碍以及后脑血管数量减少等相关表型。细胞实验结果显示，在hCMEC/D3细胞中抑制<italic>ITGB4</italic>的表达导致细胞增殖减缓，管腔形成减少及迁移能力减弱。此外，qRT-PCR结果表明，在斑马鱼胚胎中敲低<italic>itgb4</italic>抑制Wnt/β-catenin通路下游靶基因的表达。最后，在hCMEC/D3细胞中敲低<italic>ITGB4</italic>后，通过添加Wnt/β-catenin通路激活剂（BML-284）能明显挽回迁移减少的表型。结论ITGB4通过调节脑血管内皮细胞的增殖、迁移和成管等功能促进脑血管发育并参与调控血脑屏障的形成。 |
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| ISSN: | 1672-3554 |