Эффективная трансдукция Т-лимфоцитов лентивирусными частицами в онкоиммунологических исследованиях
Цель. Сравнить разные методы концентрации лентивирусных частиц для выбора оптимального способа, обеспечивающего высокий уровень трансдукции для получения CAR T-клеток в лабораторных условиях. Материалы и методы. Концентрирование лентивирусного супернатанта проводилось 4 способами: ультрафильтрац...
Saved in:
| Main Authors: | , , , , , |
|---|---|
| Format: | Article |
| Language: | Russian |
| Published: |
Practical Medicine Publishing House
2020-07-01
|
| Series: | Клиническая онкогематология |
| Subjects: | |
| Online Access: | https://bloodjournal.ru/index.php/coh/article/view/259 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| _version_ | 1850275715756326912 |
|---|---|
| author | Екатерина Константиновна Зайкова К. A. Левчук Д. Ю. Поздняков А. А. Дакс А. Ю. Зарицкий А. В. Петухов |
| author_facet | Екатерина Константиновна Зайкова К. A. Левчук Д. Ю. Поздняков А. А. Дакс А. Ю. Зарицкий А. В. Петухов |
| author_sort | Екатерина Константиновна Зайкова |
| collection | DOAJ |
| description |
Цель. Сравнить разные методы концентрации лентивирусных частиц для выбора оптимального способа, обеспечивающего высокий уровень трансдукции для получения CAR T-клеток в лабораторных условиях.
Материалы и методы. Концентрирование лентивирусного супернатанта проводилось 4 способами: ультрафильтрацией, ультрацентрифугированием, осаждением водорастворимым неионным полимером полиэтиленгликолем (ПЭГ) и ионообменной хроматографией. Функциональный вирусный титр определяли как по экспрессии репортерного белка mCherry в трансдуцированной линии HeLa, так и экспресс-тестами, основанными на иммунохроматографическом анализе (ИХА). Физический титр определяли методом ELISA. Эффективность трансдукции Т-лимфоцитов здорового донора оценивали методом проточной цитометрии по интенсивности сигнала репортерного белка FusionRed. Функциональную активность полученных CAR T-клеток анти-CD19 оценивали с помощью микроскопии после совместного культивирования с клеточной линией CD19-HeLa+, а также последующего проведения теста на цитокины.
Результаты. Очистка и концентрирование лентивируса ультрафильтрацией позволили получить наивысшее число трансдуцированных клеток — 84,7 %. Методы ультрацентрифугирования, применения ПЭГ и ионообменной хроматографии продемонстрировали 56,08, 74,22 и 21,05 % трансдукции Т-клеток соответственно. Использование экспресс-тестов ИХА показало хорошую сопоставимость (r = 0,91) с данными, полученными титрованием на клеточной линии. Эффективность трансдукции Т-клеток в среднем составляла 59,55 ± 2,94 %, а максимальное значение достигало 76,26 %.
Заключение. В работе проведена оптимизация продукции CAR T-клеток на этапе получения лентивирусных векторов и их очистки. Метод ультрафильтрации был выбран как наиболее оптимальный способ концентрирования лентивирусного супернатанта, позволяющий осуществлять эффективную трансдукцию Т-лимфоцитов и генерировать функционально активную популяцию CAR T-клеток.
|
| format | Article |
| id | doaj-art-2dc8ba167dd940e892917561f4e31653 |
| institution | OA Journals |
| issn | 1997-6933 2500-2139 |
| language | Russian |
| publishDate | 2020-07-01 |
| publisher | Practical Medicine Publishing House |
| record_format | Article |
| series | Клиническая онкогематология |
| spelling | doaj-art-2dc8ba167dd940e892917561f4e316532025-08-20T01:50:38ZrusPractical Medicine Publishing HouseКлиническая онкогематология1997-69332500-21392020-07-0113310.21320/2500-2139-2020-13-3-295-306Эффективная трансдукция Т-лимфоцитов лентивирусными частицами в онкоиммунологических исследованияхЕкатерина Константиновна Зайкова0К. A. Левчук1Д. Ю. Поздняков2А. А. Дакс3А. Ю. Зарицкий4А. В. Петухов5ФГБУ «НМИЦ им. В.А. Алмазова» Минздрава России, ул. Аккуратова, д. 2, Санкт-Петербург, Российская Федерация, 197341; Институт цитологии РАН, Тихорецкий пр-т, д. 4, Санкт-Петербург, Российская Федерация, 194064ФГБУ «НМИЦ им. В.А. Алмазова» Минздрава России, ул. Аккуратова, д. 2, Санкт-Петербург, Российская Федерация, 197341ФГБУ «НМИЦ им. В.А. Алмазова» Минздрава России, ул. Аккуратова, д. 2, Санкт-Петербург, Российская Федерация, 197341Институт цитологии РАН, Тихорецкий пр-т, д. 4, Санкт-Петербург, Российская Федерация, 194064ФГБУ «НМИЦ им. В.А. Алмазова» Минздрава России, ул. Аккуратова, д. 2, Санкт-Петербург, Российская Федерация, 197341ФГБУ «НМИЦ им. В.А. Алмазова» Минздрава России, ул. Аккуратова, д. 2, Санкт-Петербург, Российская Федерация, 197341; Институт цитологии РАН, Тихорецкий пр-т, д. 4, Санкт-Петербург, Российская Федерация, 194064; Научно-технологический университет «Сириус», Олимпийский пр-т, д. 1, Сочи, Российская Федерация, 354340 Цель. Сравнить разные методы концентрации лентивирусных частиц для выбора оптимального способа, обеспечивающего высокий уровень трансдукции для получения CAR T-клеток в лабораторных условиях. Материалы и методы. Концентрирование лентивирусного супернатанта проводилось 4 способами: ультрафильтрацией, ультрацентрифугированием, осаждением водорастворимым неионным полимером полиэтиленгликолем (ПЭГ) и ионообменной хроматографией. Функциональный вирусный титр определяли как по экспрессии репортерного белка mCherry в трансдуцированной линии HeLa, так и экспресс-тестами, основанными на иммунохроматографическом анализе (ИХА). Физический титр определяли методом ELISA. Эффективность трансдукции Т-лимфоцитов здорового донора оценивали методом проточной цитометрии по интенсивности сигнала репортерного белка FusionRed. Функциональную активность полученных CAR T-клеток анти-CD19 оценивали с помощью микроскопии после совместного культивирования с клеточной линией CD19-HeLa+, а также последующего проведения теста на цитокины. Результаты. Очистка и концентрирование лентивируса ультрафильтрацией позволили получить наивысшее число трансдуцированных клеток — 84,7 %. Методы ультрацентрифугирования, применения ПЭГ и ионообменной хроматографии продемонстрировали 56,08, 74,22 и 21,05 % трансдукции Т-клеток соответственно. Использование экспресс-тестов ИХА показало хорошую сопоставимость (r = 0,91) с данными, полученными титрованием на клеточной линии. Эффективность трансдукции Т-клеток в среднем составляла 59,55 ± 2,94 %, а максимальное значение достигало 76,26 %. Заключение. В работе проведена оптимизация продукции CAR T-клеток на этапе получения лентивирусных векторов и их очистки. Метод ультрафильтрации был выбран как наиболее оптимальный способ концентрирования лентивирусного супернатанта, позволяющий осуществлять эффективную трансдукцию Т-лимфоцитов и генерировать функционально активную популяцию CAR T-клеток. https://bloodjournal.ru/index.php/coh/article/view/259CAR T-лимфоцитыCD19рекомбинантный лентивирусконцентрирование лентивирусного препарата |
| spellingShingle | Екатерина Константиновна Зайкова К. A. Левчук Д. Ю. Поздняков А. А. Дакс А. Ю. Зарицкий А. В. Петухов Эффективная трансдукция Т-лимфоцитов лентивирусными частицами в онкоиммунологических исследованиях Клиническая онкогематология CAR T-лимфоциты CD19 рекомбинантный лентивирус концентрирование лентивирусного препарата |
| title | Эффективная трансдукция Т-лимфоцитов лентивирусными частицами в онкоиммунологических исследованиях |
| title_full | Эффективная трансдукция Т-лимфоцитов лентивирусными частицами в онкоиммунологических исследованиях |
| title_fullStr | Эффективная трансдукция Т-лимфоцитов лентивирусными частицами в онкоиммунологических исследованиях |
| title_full_unstemmed | Эффективная трансдукция Т-лимфоцитов лентивирусными частицами в онкоиммунологических исследованиях |
| title_short | Эффективная трансдукция Т-лимфоцитов лентивирусными частицами в онкоиммунологических исследованиях |
| title_sort | эффективная трансдукция т лимфоцитов лентивирусными частицами в онкоиммунологических исследованиях |
| topic | CAR T-лимфоциты CD19 рекомбинантный лентивирус концентрирование лентивирусного препарата |
| url | https://bloodjournal.ru/index.php/coh/article/view/259 |
| work_keys_str_mv | AT ekaterinakonstantinovnazajkova éffektivnaâtransdukciâtlimfocitovlentivirusnymičasticamivonkoimmunologičeskihissledovaniâh AT kalevčuk éffektivnaâtransdukciâtlimfocitovlentivirusnymičasticamivonkoimmunologičeskihissledovaniâh AT dûpozdnâkov éffektivnaâtransdukciâtlimfocitovlentivirusnymičasticamivonkoimmunologičeskihissledovaniâh AT aadaks éffektivnaâtransdukciâtlimfocitovlentivirusnymičasticamivonkoimmunologičeskihissledovaniâh AT aûzarickij éffektivnaâtransdukciâtlimfocitovlentivirusnymičasticamivonkoimmunologičeskihissledovaniâh AT avpetuhov éffektivnaâtransdukciâtlimfocitovlentivirusnymičasticamivonkoimmunologičeskihissledovaniâh |