E3泛素-蛋白连接酶Parkin介导线粒体自噬参与荷瘤小鼠心肌损伤

E3泛素-蛋白连接酶Parkin介导线粒体自噬参与荷瘤小鼠心肌损伤

目的观察荷瘤状态下小鼠心肌损伤情况，探讨<italic>park2</italic>基因编码的E3泛素-蛋白连接酶Parkin介导线粒体自噬在荷瘤小鼠心肌损伤中的作用及机制。方法通过PCR和蛋白质免疫印迹筛选和鉴定<italic>park2</italic><sup>-/-</sup>小鼠；通过皮下移植瘤技术构建荷瘤动物模型，采用小动物心脏超声分析小鼠心脏结构与功能，观察心室内径、心室容积、射血分数、缩短分数以及心室壁厚度的变化；采用病理学方法分析小鼠心脏的形态学特征；使用Fluo-3、Rhod-2、DHE-ROS及JC-...

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Main Authors: 邓世杰, 李兴会, 蔡卫斌
Format: Article
Language:zho
Published: Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University 2022-03-01
Series:Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban
Subjects:
Parkin
荷瘤状态
心肌损伤
线粒体自噬
Online Access:http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/doi/10.13471/j.cnki.j.sun.yat-sen.univ(med.sci).2022.0203/
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author 邓世杰
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description 目的观察荷瘤状态下小鼠心肌损伤情况，探讨<italic>park2</italic>基因编码的E3泛素-蛋白连接酶Parkin介导线粒体自噬在荷瘤小鼠心肌损伤中的作用及机制。方法通过PCR和蛋白质免疫印迹筛选和鉴定<italic>park2</italic><sup>-/-</sup>小鼠；通过皮下移植瘤技术构建荷瘤动物模型，采用小动物心脏超声分析小鼠心脏结构与功能，观察心室内径、心室容积、射血分数、缩短分数以及心室壁厚度的变化；采用病理学方法分析小鼠心脏的形态学特征；使用Fluo-3、Rhod-2、DHE-ROS及JC-1探针进行线粒体损伤指标检测；通过qPCR技术分析线粒体生成相关因子tfam，nrf1，线粒体融合相关因子opa1，mfn2，线粒体分裂相关因子fis1，线粒体自噬相关因子park2表达改变；通过Western Blot技术检测关键蛋白LC3 Ⅱ、LC3 Ⅰ、Parkin表达水平。结果心脏超声检测结果显示，B16黑色素瘤荷瘤小鼠心脏功能下降明显（<italic>P</italic>&lt;0.01）；电镜结果显示，荷瘤状态下小鼠心肌细胞线粒体数量增多，出现空泡化改变（<italic>P</italic>=0.032）；进一步分析显示荷瘤状态可引起心肌细胞线粒体损伤，并激活线粒体自噬；<italic>park2</italic><sup>-/-</sup>小鼠荷瘤后，其死亡率明显增加（<italic>P</italic>&lt;0.05）；对<italic>park2</italic><sup>-/-</sup>小鼠进行上述荧光探针、病理学观察及关键分子检测，结果显示<italic>park2</italic><sup>-/-</sup>小鼠线粒体损伤较WT小鼠严重，线粒体自噬过程受到抑制（<italic>P</italic>&lt;0.01）。结论E3泛素-蛋白连接酶Parkin在荷瘤状态心肌损伤过程中具有一定的保护作用，这与其介导的线粒体自噬有关。
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institution Kabale University
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publishDate 2022-03-01
publisher Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University
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spelling doaj-art-18b1a991f7d346d7b66d9008cd047edf2025-01-15T02:32:58ZzhoEditorial Office of Journal of Sun Yat-sen UniversityZhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban1672-35542022-03-014318119143484962E3泛素-蛋白连接酶Parkin介导线粒体自噬参与荷瘤小鼠心肌损伤邓世杰李兴会蔡卫斌目的观察荷瘤状态下小鼠心肌损伤情况，探讨<italic>park2</italic>基因编码的E3泛素-蛋白连接酶Parkin介导线粒体自噬在荷瘤小鼠心肌损伤中的作用及机制。方法通过PCR和蛋白质免疫印迹筛选和鉴定<italic>park2</italic><sup>-/-</sup>小鼠；通过皮下移植瘤技术构建荷瘤动物模型，采用小动物心脏超声分析小鼠心脏结构与功能，观察心室内径、心室容积、射血分数、缩短分数以及心室壁厚度的变化；采用病理学方法分析小鼠心脏的形态学特征；使用Fluo-3、Rhod-2、DHE-ROS及JC-1探针进行线粒体损伤指标检测；通过qPCR技术分析线粒体生成相关因子tfam，nrf1，线粒体融合相关因子opa1，mfn2，线粒体分裂相关因子fis1，线粒体自噬相关因子park2表达改变；通过Western Blot技术检测关键蛋白LC3 Ⅱ、LC3 Ⅰ、Parkin表达水平。结果心脏超声检测结果显示，B16黑色素瘤荷瘤小鼠心脏功能下降明显（<italic>P</italic>&lt;0.01）；电镜结果显示，荷瘤状态下小鼠心肌细胞线粒体数量增多，出现空泡化改变（<italic>P</italic>=0.032）；进一步分析显示荷瘤状态可引起心肌细胞线粒体损伤，并激活线粒体自噬；<italic>park2</italic><sup>-/-</sup>小鼠荷瘤后，其死亡率明显增加（<italic>P</italic>&lt;0.05）；对<italic>park2</italic><sup>-/-</sup>小鼠进行上述荧光探针、病理学观察及关键分子检测，结果显示<italic>park2</italic><sup>-/-</sup>小鼠线粒体损伤较WT小鼠严重，线粒体自噬过程受到抑制（<italic>P</italic>&lt;0.01）。结论E3泛素-蛋白连接酶Parkin在荷瘤状态心肌损伤过程中具有一定的保护作用，这与其介导的线粒体自噬有关。http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/doi/10.13471/j.cnki.j.sun.yat-sen.univ(med.sci).2022.0203/Parkin荷瘤状态心肌损伤线粒体自噬
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