槲皮素调控AMPK活性诱导HL-60细胞自噬与凋亡
【目的】观察槲皮素对急性髓系白血病HL-60 细胞凋亡与自噬的影响及腺苷酸活化蛋白激酶 (AMPK)活性的变化,探讨槲皮素抗白血病的分子机制。【方法】流式细胞仪、电镜、蛋白质印迹法检测槲皮素孵 育HL-60细胞24、48 h后细胞凋亡与自噬的水平;检测槲皮素作用后HL-60细胞AMPK、p-AMPK的表达;流式、 蛋白质印迹法检测不同浓度槲皮素与AMPK小分子抑制剂Compound C共同孵育HL-60细胞后AMPK活化的情 况及细胞凋亡、自噬的变化。【结果】槲皮素可诱导HL-60细胞发生凋亡,且细胞凋亡率与槲皮素浓度、作用时 间呈正相关。槲皮素浓度越大,细胞凋亡率越高(P = 0....
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Main Authors: | , , , , , , , , |
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Format: | Article |
Language: | zho |
Published: |
Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University
2018-01-01
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Series: | Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban |
Subjects: | |
Online Access: | http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/43566313/ |
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author | 肖洁 尹松梅 谢双锋 李益清 聂大年 马丽萍 王秀菊 吴裕丹 刘红云 |
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description | 【目的】观察槲皮素对急性髓系白血病HL-60 细胞凋亡与自噬的影响及腺苷酸活化蛋白激酶
(AMPK)活性的变化,探讨槲皮素抗白血病的分子机制。【方法】流式细胞仪、电镜、蛋白质印迹法检测槲皮素孵
育HL-60细胞24、48 h后细胞凋亡与自噬的水平;检测槲皮素作用后HL-60细胞AMPK、p-AMPK的表达;流式、
蛋白质印迹法检测不同浓度槲皮素与AMPK小分子抑制剂Compound C共同孵育HL-60细胞后AMPK活化的情
况及细胞凋亡、自噬的变化。【结果】槲皮素可诱导HL-60细胞发生凋亡,且细胞凋亡率与槲皮素浓度、作用时
间呈正相关。槲皮素浓度越大,细胞凋亡率越高(P = 0.000);随着作用时间的延长,细胞凋亡率进一步增加(P =
0.000);不同浓度槲皮素(25和50 μmol/L)与HL-60细胞共同孵育24 h及48 h后,电镜观察到自噬体形成;绿色
荧光标记自噬体后用流式细胞仪对荧光强度进行检测,结果发现槲皮素作用后细胞内绿色荧光强度明显较对照
组增加(P = 0.001);Western blot 检测LC3Ⅱ/Ⅰ比值增高(P < 0.001);证实槲皮素能够诱导HL-60 细胞发生自
噬。槲皮素能够浓度依赖性的激活AMPK活性,使得AMPK的磷酸化水平增高(P = 0.001)。槲皮素与Compound
C联合用药组与单用槲皮素组比较,p-AMPK的表达降低,Compound C能够阻断槲皮素诱导的AMPK磷酸化。槲
皮素+Compound C组与单用槲皮素组比较,细胞凋亡率下降(P < 0.001);抑制AMPK的活性后,槲皮素诱导细胞
凋亡的作用减弱。槲皮素+Compound C组LC3Ⅱ/Ⅰ比值低于单用槲皮素组(P < 0.001);抑制AMPK的活性后,槲
皮素诱导细胞自噬的作用减弱。【结论】槲皮素通过诱导HL-60细胞凋亡与自噬发挥抗白血病作用,AMPK可能
是槲皮素诱导细胞凋亡与自噬的重要信号分子。 |
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publisher | Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University |
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