环状RNA circ_0120051通过miR-144-3p/IDH2轴抑制心肌成纤维细胞的纤维化表型研究 - 梁俣; 胡志琴; 温艺红; 伍华燕; 王娅; 刘宇鹏; 单志新; 方咸宏 (Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban)
目的研究环形 RNA circ_0120051对心肌成纤维细胞的纤维化表型的调控作用和机制。方法通过实时萤光定量PCR（RT-qPCR）检测健康器官捐献者（n=24）与心力衰竭（HF）病人（n=21）心肌标本中 circ_0120051及其宿主基因溶质载体家族8成员A1（SLC8A1）的表达水平。核糖核酸外切酶（RNase R）消化实验鉴定circ_0120051的RNA稳定性。RT-qPCR检测circ_0120051在人心肌细胞AC16中的核质分布情况。利用腺病毒在C57BL/6乳小鼠心肌成纤维细胞（mCFs）中过表达circ_0120051，通过RT-qPCR和Western blot检测过表达circ_0120051对mCFs中纤维化相关基因表达的影响，利用细胞划痕实验检测对mCFs迁移能力的影响。通过RNA免疫共沉淀技术（RIP）验证circ_0120051与miR-144-3p间的结合作用，利用双萤光素酶报告基因实验鉴定miR-144-3p与靶基因异柠檬酸脱氢酶2（Idh2） 3’-UTR的结合位点。结果Circ_0120051在心衰病人心肌中表达显著增加，而其宿主基因SLC8A1表达无显著差异。Circ_0120051主要定位于人心肌细胞的胞质中。RNase R消化实验证实circ_0120051相对于线性SLC8A1 mRNA具有典型的环状RNA稳定性。过表达circ_0120051可抑制mCFs中纤维化相关基因表达和mCFs的迁移能力。RIP实验证实circ_0120051与miR-144-3p之间具有明显结合作用。在mCFs中转染miR-144-3p可促进纤维化相关基因的表达，并有效逆转circ_0120051对mCFs纤维化表型的抑制作用。双萤光素酶报告基因实验证实miR-144-3p与Idh2的3’-UTR存在结合作用。miR-144-3p可在转录水平抑制mCFs中Idh2表达，而过表达circ_0120051可增加mCFs中IDH2表达。在mCFs中转染miR-144-3p和Idh2的小干扰RNA（siRNA），可一致性地逆转circ_0120051对纤维化相关基因表达和mCFs迁移的抑制作用。结论Circ_0120051通过特异结合miR-144-3p并增加其靶基因IDH2表达来发挥抑制mCFs纤维化表型的作用。