基于ＤＥＮＶ－ｐｒＭ／Ｅ基因构建ＤＥＮＶ－ＶＬＰ及其免疫学特性 (Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban)
摘 要：【目的】 构建和表达登革病毒４型病毒样颗粒，初步研究其免疫学特性。【方法】 用ＲＴ－ＰＣＲ法扩增ＤＥＮＶ４－ｐｒＭ／Ｅ基因，构建重组质粒ｐＧＡＰＺ－ｓｐｒＭ／Ｅ－Ｄ４，转化Ｘ３３酵母菌株，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ鉴定目的蛋白表达。切片电镜检测病毒样颗粒，蔗糖密度梯度离心纯化。免疫三组Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠，每组１５只。采用间接ＥＬＩＳＡ检测抗原特异性抗体，间接免疫荧光法检测免疫血清与天然病毒粒子的结合，流式细胞术分析小鼠脾淋巴细胞表型，酶联免疫斑点法（ＥＬＩＳＰＯＴ）检测脾分泌ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α和ＩＬ－１０的细胞。【结果】重组质粒在酵母中以病毒样颗粒形式表达，为直径２０ ～ ３０ ｎｍ的球形颗粒，ＶＬＰ免疫组刺激小鼠产生抗体与灭活病毒组相似，流式及ＥＬＩＳＰＯＴ结果提示ＤＥＮＶ４－ＶＬＰ与灭活病毒组相似，用登革病毒抗原刺激后，分泌ＩＦＮ－γ，ＴＮＦ－α的细胞数目明显增加，各组分泌ＩＬ－１０细胞数目的整体水平均不高。【结论】应用毕赤酵母表达系统成功表达获得了ＤＥＮＶ４－ＶＬＰ，具有良好的免疫原性，可诱导Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠产生有效的体液免疫应答，并能诱导Ｔｈ１型免疫应答而诱导Ｔｈ２型免疫应答较弱。