小鼠端粒酶蛋白亚单位重组腺病毒载体的构建及鉴定 - 姜楠; 陆敏强; 李华; 蔡常洁; 杨扬; 许赤; 冯炼强; 陈规划 (Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban)
【目的】构建小鼠端粒酶蛋白亚单位（mouse telomerase reverse transcriptase，mTERT）基因重组腺病毒载体，为下一步研究其体外表达和动物实验研究提供基础。【方法】从肝癌细胞中提取总RNA。采用RT-PER技术扩增mTERT的基因编码区序列，将序列定向克隆至真核表达载体pAC，将此表达质粒与腺病毒重组质粒pJM17共同转染293细胞，经同源重组产生重组腺病毒载体Ad-mTERT，纯化后的重组腺病毒载体Ad-mTERT在293细胞大量扩增并通过氯化铯密度梯度离心法纯化，测定病毒滴度。【结果】PCR及酶切证实：mTERTDNA正确克隆到穿梭质粒pAC中，带mTERTDNA的表达盒成功重组到腺病毒载体基因组E1A缺失区，并在293细胞中成功包装出具有感染活性的重组腺病毒Ad-mTERT。【结论】成功构建了小鼠TERT基因重组腺病毒载体，为研究其用于肿瘤的基因治疗奠定基础。