间充质干细胞对B细胞增殖及免疫调节功能的影响 - 刘秋莉; 肖崇珺; 黄牡丹; 黄里; 陈小湧; 郑海清 (Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban)
【目的】研究观察间充质干细胞（MSC）在体外培养体系对B细胞增殖和免疫调节作用的影响。【方法】采用密度梯度离心法分离健康捐献者来源的骨髓30mL。用含100mmol/L胎牛血清的L-DMEM培养基对分离出的MSC进行贴壁培养。培养至第6代时，进行多向分化和细胞表型鉴定。获取健康供者外周血单个核细胞，并通过流式细胞仪分选出CD19+B细胞，进行荧光染料CFSE标记，然后分成单独培养组（CD19+B细胞）和共培养组（按CD19+B∶MSC：=5∶1的比例共培养），两组均采用CpG+CD40L刺激，96h后检测B细胞的增殖情况，并通过流式细胞荧光分选技术（FACS）检测CD19+CD5+B细胞的百分比及其分泌的IL-10水平；进一步观察单独培养组和共培养组的CD19+B细胞对CD4+T细胞增殖以及分泌IFN-γ的影响，最后加入IL-10中和抗体，再次验证B细胞对CD4+T细胞增殖以及分泌IFN-γ的影响。【结果】健康捐献者来源的MSC具有多向分化能力，并表达CD29、CD44、CD73、CD90、CD105、CD166，不表达CD45和CD34。与单独培养组比较，共培养组中的CD19+B细胞与MSC在体外共培养3d后，CD19+B细胞增殖比例明显提高，并显著抑制CD4+T细胞分泌IFN-γ的功能。进一步分析CD19+B细胞的亚群，发现与单独培养组比较，共培养组中的CD5+B细胞数量的百分比由（21.31±1.22）%增加至（31.27±0.92）%（P=0.014）；而且其IL-10的分泌水平由（1.09±0.08）%增加至（2.44±0.06）%（P<0.001）。当在共培养组中加入IL-10中和抗体后，发现与MSC共培养的B细胞抑制CD4+T细胞增殖和分泌IFN-γ的功能的能力明显减弱。【结论】MSC能促进CD19+B细胞的增殖，同时具有增强CD19+B细胞抑制CD4+T细胞分泌IFN-γ，这可能与分泌IL-10的CD19+CD5+B细胞的表达增加相关。