丙型肝炎病毒核心蛋白对肝癌细胞ｓｔａｔ３通路及细胞周期蛋白ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１的调控作用 (Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban)
【目的】 探讨丙型肝炎病毒核心蛋白（ＨＣＶｃ）是否调控肝癌细胞中ｓｔａｔ３通路及细胞周期蛋白ｃｙｃｌｉｎ Ｄ １的表达，参与肝癌细胞的恶性生物学行为。【方法】 将含ＨＣＶｃ基因的真核表达质粒ｐＥＧＦＰ－Ｎ３－ＨＣＶｃ瞬时转染人肝癌细胞ＨｅｐＧ２使ＨＣＶｃ过表达，用ｓｉＲＮＡ－ＨＣＶｃ敲除ＨｅｐＧ２细胞中ＨＣＶｃ的表达，荧光显微镜检测绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）的表达，Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ＨＣＶｃ、总ｓｔａｔ３（ｓｔａｔ３）、磷酸化ｓｔａｔ３（ｐ－ｓｔａｔ３）及ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１蛋白的表达；流式细胞术及ＭＴＴ法检测细胞周期变化及细胞增殖情况。【结果】 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ结果显示，通过瞬时转染而过表达ＨＣＶｃ的ＨｅｐＧ２细胞中，ＨＣＶｃ、ｐ－ｓｔａｔ３及ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１的蛋白水平高于空白质粒转染组和未转染组；ｓｉＲＮＡ－ＨＣＶｃ敲除ＨＣＶｃ表达后，ＨＣＶｃ、ｐ－ｓｔａｔ３和ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１蛋白的表达下调；酪氨酸磷酸化抑制剂ＡＧ４９０（ＪＡＫ２特异性拮抗剂）处理可下调过表达ＨＣＶｃ的ＨｅｐＧ２细胞中ｐ－ｓｔａｔ３和ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１蛋白的表达。流式细胞术显示过表达ＨＣＶｃ可促进细胞向Ｇ ２ ／Ｍ期进展。ＭＴＴ法结果显示过表达ＨＣＶｃ使ＨｅｐＧ２细胞增殖能力增加。 【结论】 ＨＣＶｃ可活化ＨｅｐＧ２细胞中ｓｔａｔ３通路，调控细胞周期蛋白ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１的表达，促进细胞周期进展及细胞增殖，可能与肝癌的发展有关。