PCR 技术对Wilson 病基因进行定点突变的研究 - 闫振文; 梁秀龄; 杨春水; 侯国庆; 王 莹 (Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban)
【目的】利用聚合酶链反应(PC R)技术对Wilson 病(WD)基因进行体外定点突变的研究。【方法】采用PCR 定点 突变技术, 首先设计两对引物, 将突变位点设计在引物上, 通过重叠延伸法两次PCR 扩增, 扩增片段上含有所需要的突变位 点, 最后将扩增片段克隆入pRc/ CMV 载体中。【结果】DNA 测序表明在预期位点已经发生突变,WD 基因第778 位密码子由 精氨酸(Arg)残基突变为亮氨酸残基(Leu), 用PCR 定点突变技术成功构建Wilso n 病基因突变体。【结论】PCR 技术诱导定点 突变准确、高效。Wilson 病基因突变体的构建成功, 为进一步研究该突变位点导致Wilson 病的发病机制和Wilson 病蛋白的结 构和功能的关系奠定了基础。