E3泛素-蛋白连接酶Parkin介导线粒体自噬参与荷瘤小鼠心肌损伤 - 邓世杰; 李兴会; 蔡卫斌 (Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban)
目的观察荷瘤状态下小鼠心肌损伤情况，探讨park2基因编码的E3泛素-蛋白连接酶Parkin介导线粒体自噬在荷瘤小鼠心肌损伤中的作用及机制。方法通过PCR和蛋白质免疫印迹筛选和鉴定park2-/-小鼠；通过皮下移植瘤技术构建荷瘤动物模型，采用小动物心脏超声分析小鼠心脏结构与功能，观察心室内径、心室容积、射血分数、缩短分数以及心室壁厚度的变化；采用病理学方法分析小鼠心脏的形态学特征；使用Fluo-3、Rhod-2、DHE-ROS及JC-1探针进行线粒体损伤指标检测；通过qPCR技术分析线粒体生成相关因子tfam，nrf1，线粒体融合相关因子opa1，mfn2，线粒体分裂相关因子fis1，线粒体自噬相关因子park2表达改变；通过Western Blot技术检测关键蛋白LC3 Ⅱ、LC3 Ⅰ、Parkin表达水平。结果心脏超声检测结果显示，B16黑色素瘤荷瘤小鼠心脏功能下降明显（P<0.01）；电镜结果显示，荷瘤状态下小鼠心肌细胞线粒体数量增多，出现空泡化改变（P=0.032）；进一步分析显示荷瘤状态可引起心肌细胞线粒体损伤，并激活线粒体自噬；park2-/-小鼠荷瘤后，其死亡率明显增加（P<0.05）；对park2-/-小鼠进行上述荧光探针、病理学观察及关键分子检测，结果显示park2-/-小鼠线粒体损伤较WT小鼠严重，线粒体自噬过程受到抑制（P<0.01）。结论E3泛素-蛋白连接酶Parkin在荷瘤状态心肌损伤过程中具有一定的保护作用，这与其介导的线粒体自噬有关。